怎么数细胞个数(细胞计数实验报告)

一、血细胞计数板的计算方法高中生物

血细胞计数板的计算方法（高中生物）如下：

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。

我们数的是每个小格中的细胞数，要算一个大格中的细胞数，一个大格中有400个小格，所以要乘以400。

每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。其计算方法如下：

1．16×25的计数板计算公式：

细胞数 ml=（100小格内的细胞数 100）×400×1000×稀释倍数

2．25×16的计数板计算公式：

细胞数 ml=（80小格内的细胞数 80）×400×1000×稀释倍数

操作方法：

1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。

2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。

6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

二、血细胞怎么做计数实验

实验

目的原理了解血细胞计数的原理并掌握红细胞、白细胞、血小板计数的方法，红细胞计数结果结合血红蛋白值还可以计算出红细胞平均血红蛋白量(MCH)可作为生理机能检查和临床诊断的指标。用相应的稀释液将血液稀释若干倍(另有抗凝、固定、着色作用)，置于计数室中，在显微镜下计数一定容积内的血细胞数。稀释血液有血细胞吸管法和试管法，本实验采用后者。

实验对象与用品鸡或家兔。血细胞计数板、专用盖玻片、吸血管、显微镜、手揿计数机、血细胞稀释液、拭镜纸、毛笔。

方法步骤

(一)熟悉计数室

血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer)计数板在中央横沟的两边各有一计数室，两计数室结构完全相同。计数室较两边的盖玻片支柱低0.1毫米。因此，放上盖玻片时，计数板与其间距即计数室空间的高为0.1毫米(图8-1)。在低倍显微镜下可见计数室被双线划分成９个边长为１毫米的大方格。四角的大方格又各分为１６个中方格，这是用来计数白细胞的。中央大方格被划分为２５个中方格，每一中方格又划分成１６个小方格(图8－2称２５×１６，也有的计数板为１６×２５的，小方格面积一致)。中央大方格的四角及中心５个中方格(１６×２５者则为四角上的中方格)为红细胞或血小板计数范围。

(二)红细胞计数

先用试管稀释法制备禽类血细胞悬液：将禽类红细胞稀释液Ⅰ、Ⅱ分别置水浴锅中预热到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL于试管中，用吸血管加入新鲜鸡血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混匀，置该水浴锅中保温５０s左右，置室温，即为待检的血细胞悬液。可用于充液计数。取干洁的计数板，置于水平的显微镜载物台上，盖上盖玻片，使两侧各空出少许。摇匀血细胞悬液，用滴管吸取，将滴管尖轻轻置于盖玻片边缘外，让滴出的血细胞悬液凭毛细管作用吸入计数室内，刚好充满计数室为宜(图8－3)。静置２min后计数，先用低倍镜观察，不均匀则抛弃。计数时用虹彩、集光器、反光镜等调节入射光角度和强度，认清计数室位置。采用“由上至下，由左至右，顺序如弓”的顺序，对压边线细胞采取“数上不数下，数左不数右”的原则(图8～4)。依次计数并记录５个中方格中分别有多少个红细胞。

(三)血小板计数

采取血液并立即与抗凝剂混合(由于血小板具有趋向于凝集和粘附于异物表面的特性)。以血小板稀释液(１０％EDTANa2１０mL与０.８％NaCl９０mL组成)将血液稀释２００倍，混匀后滴入血细胞计数室内，静置１５min，待血小板下沉后。于高倍镜下计数(同红细胞计数)。在高倍镜下血小板呈椭圆形、圆形或不规则的折光小体分布于红细胞间，注意与杂质相区别。也可用复方尿素稀释液稀释血液，应静置２０min以上，待红细胞充分溶解后再充液计数。

(四)计算

按计数室构造及血液稀释倍数,将血细胞计数结果换算成每立方毫米中血细胞的个数。以每１００mL血液中的血红蛋白量（g）乘以１０再除以红细胞数（106/mm3）得红细胞平均血红蛋白量（MCN，单位μμg）。

(五)仪器洗涤

计数板、盖玻片和测定管用清水冲洗，再用绸布或细布沾干。

要求与思考题

１.计算结果，报告中简要说明计算过程。求出本组同学测定的均值并评价之。

２.了解各类稀释液成分，分析各物质的作用。

注意事项

１.充液前应充分混匀血细胞悬液，充液要连续、适量，充液后应待血细胞下沉后再计

数。

２.计数板、盖玻片、吸血管及测定管等用过后必须立即按要求洗涤干净。

组织建议将相同类型的计数板集中在一个组内，便于指导。本实验属于基本操作，各位朋友均应独立操作得出结果。

附注：

1.本法可同时计数禽类白细胞数，计算方法也类似。

2.禽类血细胞稀释液为：

Ⅰ液

中性红 25.0mg

NaCl 0.9g

加蒸馏水至100.0mL

Ⅱ液

结晶紫 12.0mg

柠檬酸钠 3.8g

福尔马林 0.8mL

加蒸馏水至100.0mL

3.哺乳类红细胞稀释液可用生理盐水或阿扬(Hayem)氏液(NaCl 1g，Na2SO4·10H2O 5g，HgCl2 0.5，加蒸馏水至200mL过滤)。白细胞稀释液成分为冰醋酸0.1mL，1%龙胆紫1mL加蒸馏水至100mL，或直接用2%醋酸溶液。

4.血小板复方尿素稀释液配方为：尿素10g，柠檬酸钠0.5g，甲醛0.1mL，加蒸馏水到100mL，混合，待完全溶解后过滤。置冰箱内可保存1～2周。

三、红细胞计数公式

红细胞的计数公式为N×25/5×10×106×200=N×1010。

N表示5个中方格内数得红细胞数；×25/5：由5个中方格红细胞数，换算为一个大方格红细胞数×10：由一个大方格红细胞数，换算为1ml稀释血液内红细胞数×106：1L=106ml；×200：为血液稀释倍数之前红细胞的计数。

红细胞计数通常采用人工的手段，在显微镜下计数多个视野的红细胞数量，从红细胞稀释液中取出一部分进行涂片。

四、血球计数板的计数公式

红细胞数/L=N×5×10×稀释倍数。N为：五个中方格的RBC总数。

计数需要注意的：

1、目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数。

2、以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度。

3、如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换物镜，目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定。

扩展资料

血球计数板优点：此法是在显微镜下直接进行测定，方便快捷并且仪器损耗较小。

血球计数板缺点：在一定的容积中的微生物的个体数目包括活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢，若是观测细菌或是霉菌，就要换成油镜了！

参考资料

百度百科-血球计数板